U biorcy przeszczepu z rozsianą infekcją amebiczną (wydanie z 14 lipca), Slater i in. donoszą, że początkowo pominięto organizmy po zbadaniu próbki pobranej z biopsji skóry hematoksyliną i eozyną. Kiedy podejrzewamy infekcję acanthamoeba, używamy Calcofluor white M2R, niedrogiego (około 10 centów za test), bezbarwnego związku, który jest szeroko dostępny w handlu (z American Cyanamid, Difco, Polysciences, Remel i Sigma). Poprzez wiązanie do polisacharydów, takich jak celuloza i chityna, fluorochrom ten uwydatnia cybki amebiczne, spory mikrosporidialne, grzyby nitkowate, drożdże, Pneumocystis carinii, algi i obcy materiał roślinny.
Biały calcofluor (lub pochodna toluilenu) jest prawdopodobnie zastrzeżonym składnikiem detergentów zawierających środki wybielające. Środek sprawia, że tkaniny stają się jaśniejsze, emitując jasnoniebieskie światło po ekspozycji na promieniowanie ultrafioletowe. Znaleźliśmy podobny efekt w testach na ameba: błyszczą cysty. Do tej procedury używamy Liquid Tide z Bleach Alternative, ale każdy produkt zawierający optyczny wybielacz nie chlorowy powinien również działać.
Najpierw rozcieńczamy produkt komercyjny 1:30. Kilka kropel wykorzystuje się do wykonania mokrego montażu pod szkiełkiem nakrywkowym do wymazów. W przypadku odcinków tkankowych plamę można pozostawić na około pięć minut, a następnie spłukać wodą. Acanthamoeba i grzyby barwią się na zielono lub niebiesko, w zależności od filtrów stosowanych w mikroskopii fluorescencyjnej. Niektóre organizmy świecą jaśniej, jeśli pH zostanie podniesione przed barwieniem. Wybielanie przez wzbudzenie ultrafioletowe powoduje stopniowe zanikanie intensywności fluorescencji.
Zgadzamy się, że rutynowe stosowanie plam laboratoryjnych wymaga odpowiedniej kontroli jakości ze slajdami kontrolnymi, ale produkty z lokalnego sklepu spożywczego mogą pomóc w szybkiej diagnozie chorób pasożytniczych i grzybiczych.
Kirk R. Wilhelmus, MD
Michael S. Osato, Ph.D.
Baylor College of Medicine, Houston, TX 77030
Odniesienie1. Slater CA, Sickel JZ, Visvesvara GS, Pabico RC, Gaspari AA. Skuteczne leczenie rozsianej infekcji acanthamoeba u pacjenta z obniżoną odpornością. N Engl J Med 1994; 331: 85-87
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
Odpowiedź
Autorzy odpowiadają:
Do redakcji: Doceniamy komentarze Wilhelmusa i Osato i zgadzamy się, że torbiele amebiczne w tkankach rzeczywiście podkreślonoby za pomocą plamy zawierającej Calcofluor. Jednak próbki skóry pobrane od naszego pacjenta zawierały wyłącznie amebiczne trofozoity, które nie są barwione tym odczynnikiem, ponieważ nie zawierają polimerów .-połączonych polimerem sachidów zawartych w torbieli amebic.1 Zatem ten rodzaj plam nie był użyteczny w identyfikacji akantamoeby trofozoity w próbkach pobranych od pacjenta, który opisaliśmy. Nawet jeśli torbiele amebic były obecne w tkance zabarwionej barwnikiem zawierającym Calcofluor, dalsze procedury (hodowla amebiczna, mikroskopia elektronowa lub immunobarwienie) byłyby konieczne do zidentyfikowania gatunku acanthamoeby, ponieważ barwienie Calcofluor jest niespecyficzne.2
Ambrowe trofozoity zostały rozpoznane w skrawkach tkanek naszego pacjenta, które zostały zabarwione hematoksyliną i eozyną Ponieważ nasze powtarzane hodowle dla organizmów amebowych były ujemne, wykorzystaliśmy pośrednią immunofluorescencję na skrawkach tkanek ze specyficzną surowicą odpornościową w celu zidentyfikowania i wyspecyfikowania rhysodes Acanthamoeba. Na podstawie tych konkretnych informacji zaplanowaliśmy terapię antybakteryjną, która okazała się skuteczna.
Barwniki zawierające kalcofluor mogą być skutecznymi odczynnikami w badaniach przesiewowych na obecność pasożytów i grzybów w próbkach tkanek, ale wynik negatywny nie wyklucza obecności alternatywnych (niebarwiących) form w organizmach dimorficznych, takich jak akantamoeba.
Anthony A. Gaspari, MD
Cathy A. Slater, MD
University of Rochester Medical Center, Rochester, NY 14642
Govinda S. Visvesvara, Ph.D.
Ośrodki Kontroli i Prewencji Chorób, Shamblee, GA 30341
2 Referencje1. Wilhelmus KR, Osato MS, Font RL, Robinson NM, Jones DB. Szybkie rozpoznanie zapalenia rogówki Acanthamoeba za pomocą Calcofluor White. Arch Ophthalmol 1986; 104: 1309-1312
Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Monheit JE, Cowan DF, Moore DG. Szybkie wykrywanie grzybów w tkankach za pomocą mikroskopii Calcofluor White i fluorescencyjnej. Arch Pathol Lab Med 1984; 108: 616-618
Web of Science MedlineGoogle Scholar
(3)
[przypisy: plamisty roślina trująca, zrazik wątrobowy, lekarz rodzinny słowackiego ]
Powiązane tematy z artykułem: lekarz rodzinny słowackiego plamisty roślina trująca zrazik wątrobowy